Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) — это один из методов молекулярно-биологической, или ДНК-диагностики. Его суть заключается в обнаружении инфекционного возбудителя в биологическом образце генетического материала (ДНК или РНК).

Исследования проводятся на базе клинико-диагностической лаборатории. Её оборудуют, согласно требованиям, которые предъявляются к данному типу лабораторий.

Например, стандарты оснащения лаборатории, которая работает на базе кожно-венерологического диспансера, утверждены в Приказе Министерства здравоохранения РФ от 15 ноября 20102 г. №924 (приложение №16 к «Порядку оказания медицинской помощи по профилю «дерматовенерология»).

Исследования в ПЦР лаборатории

В лаборатории проводится широкий спектр исследований. С помощью полимеразной цепной реакции можно выявить вирусные гепатиты B, C, D, G; урогенитальные инфекции; инфекции, которые передаются половым путем (ИППП), папиломмавирусные, TORCH и герпесвирусные инфекции; оппортунистические, гнойно-септические, внутриутробные, кишечные и нейроинфекции; инфекции дыхательного тракта.

ПЦР-диагностика очень эффективна, поскольку позволяет выявить возбудителя инфекции и диагностировать заболевание ещё до его клинических проявлений. При этом исключаются ложные результаты.

Требования к помещению

В лаборатории выделяют рабочие зоны, которые соответствуют этапам ПЦР-анализа:

• Для приёма, регистрации, разбора и первичной обработки биоматериала. Здесь принимают, сортируют, маркируют и хранят материал.
• Для выделения ДНК/РНК. Оптимально размещать зону в отдельном помещении, но допускается и размещение в помещениях, где проводят другие исследования (кроме генно-инженерных!). В последнем случае необходимо оборудовать ПЦР-бокс или бокс биологической безопасности, в котором запрещено проводить любые другие методы исследований, кроме ПЦР. Под зону выделяют помещение площадью 15–20 кв. м.
• Для приготовления реакционных смесей и проведения исследований. Здесь готовят ПЦР-смеси, вносят выделенные препараты ДНК/РНК в пробирку для ПЦР. Оптимальная площадь помещения 15–20 кв. м.
  Этапы выделения ДНК/РНК и приготовления смесей проводят в разных помещениях. Однако допускается совместить их. В таком случае обязательно оборудуют боксы – отдельный для каждого этапа.
• Для детекции продуктов амплификации. Оптимально размещать зону в отдельном помещении, в котором имеется ПЦР-бокс. Обычно при детекции используют метод электрофореза и гибридизационного анализа. Если необходимо использовать оба метода одновременно, необходимо выделить отдельную зону для проведения гибридизационного анализа. При этом расходные материалы и посуду для каждого метода используют свою. Оптимальная площадь помещения для детекции составляет 25–30 кв. м.

Если в лаборатории применяют метод real-time PCR, то не нужно выделять зону детекции.

Кроме рабочих зон, необходимо выделить и вспомогательные помещения: архива (для хранения документации), комнаты для персонала (отдыха, приёма пищи), раздевалки, кабинета заведующего, склада, санузла.

При возможности рекомендовано выделить отдельное помещение под автоклавную для обеззараживания исследуемого материала. Если такой возможности нет, то при соблюдении правил биологической безопасности допускается общая с другими подразделениями лаборатории автоклавная.

Кроме обязательного зонирования, к помещению ПЦР-лаборатории предъявляются такие технические требования: наличие водопровода, канализации, электричества, отопления, освещения (естественного и искусственного), приточно-вытяжной или вытяжной вентиляции, систем кондиционирования и пожаротушения.

Не допускается воздухообмен между зоной детекции и остальными зонами.

Внутренняя отделка

Стены, потолок и пол должны иметь гладкую поверхность без щелей, стыков, трещин, а пол – покрыт антискользящим материалом. Они должны быть устойчивыми к воздействию дезинфицирующих и моющих средств, легко обрабатываться.

Согласно «Методическим указаниям по применению бактерицидных ламп для обеззараживания воздуха и поверхности в помещениях», во всех рабочих зонах ПЦР-лаборатории устанавливают бактерицидные лампы из расчёта 2,5 Вт/куб. м.

Оборудование и мебель

Согласно Стандарту оснащения молекулярно-биологического подразделения клинико-диагностической лаборатории, необходимо такое оборудование: термостат твердотельный для пробирок типа Эппендорф, аплификатор, насос с колбой-ловушкой, микроцентрифуга для пробирок, центрифуга-встряхиватель (вортекс), настольный бокс для ПЦР, трансиллюминатор, аппарат для проведения горизонтального электрофореза с источником питания, Прибор для чтения результатов исследования на биомикрочипах (ДНК-чипах), камера для гибридизации (для проведения исследований на биомикрочипах), комплект оборудования для проведения исследований методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, наборы одно- и восьмиканальных пипеточных дозаторов, холодильники (бытовой и низкотемпературный от –70 до –80 °С).

Также ПЦР-лабораторию нужно оснастить: системой гель-электрофореза (для отображения результатов) и гель-документации (для их анализа).

В ПЦР-лаборатории устанавливают медицинскую мебель — рабочие столы, стулья, тумбочки, полки и шкафы (для хранения посуды, материалов и т. д., а также документации).

Главные требования к медицинской лабораторной мебели — эргономичный дизайн, удобство, долговечность, устойчивость к воздействию химических и других веществ.